发情周期

犬发情周期可分为：休情期、发情前期、发情期与排卵、发情后期，要充分了解发情周期的每个阶段犬生理变化特征和指标才不会导致您的判断错误。

休情期：休情期指发情后期到下一次发情前期之间的一段时间被称为休情期。

发情前期：发情前期是指从出血的第一天到发情期与排卵之间的一段时间被称为发情前期，发情前期是发情周期的第一个阶段，出血的第一天是发情前期的开始，发情前期的症状是母犬外阴肿胀伴有血样分泌物流出，触诊阴唇发硬，母犬会试图吸引交配公犬，但不接受公犬交配，发情前期可能持续4-13天，小型犬持续8-9天，大型犬12-14天。

发情期与排卵：是指母犬开始愿意接受交配至拒绝交配的时间，紧接着进入发情后期，两期之间是一种自然过渡，并没有什么严格的界线。发情期的母犬外阴部肿胀达到最大而柔软，不像发情前期触诊发硬，并开始消退，内壁发亮，分泌物增多，分泌物为粉色或淡黄色，阴道涂片中含有大量完全角化细胞和不完全角化细胞，在这里特别“提醒”的是发情期母犬会出现较强的交配欲望，抚拍尾根部，尾巴偏向一侧，也就是犬主经常说的“给尾”，阴唇变软而有节律的收缩，喜欢挑逗公犬，公犬接近时站立不动 愿意接受公犬的交配，这并不一定是最佳的配种时期。发情期持续时间为4-13天，平均为9天。

排卵：是指卵子从成熟的卵泡中排出进入输卵管的过程。当卵巢的卵泡成熟时由于卵泡液的不断增加，从而使卵泡的部分突出卵巢表面，突出部分的卵泡膜变薄，同时颗粒层细胞开始脂肪变性，卵泡液侵入卵丘细胞之间使卵丘与颗粒层逐渐分离。排卵前，卵泡膜的外膜分离，内膜乃通过裂口而突出形成一个乳头状的小突起或称排卵眼点。它在卵巢的表面膨胀而变薄，膨胀的排卵眼点很快破裂，流出一些卵泡液，片刻之后，卵子移出裂口，裂口逐渐变长，接着许多卵泡液就把卵子冲出，而被输卵管伞接纳，有伞内的纤毛细胞将卵子移出输卵管中，排出的卵子尚未成熟，处于初级卵母细胞阶段，必须在输卵管中经过减数分裂，放出第一极体而变为次级卵母细胞，才能获得受精能力。卵泡的发育在排卵前11天左右开始，到排卵前2~3天迅速生长成熟，于发情期的第1~2天排卵，母犬为自发性持续排卵，虽然可以在持续14天内排出卵子，但大约80%的卵子在开始排卵后48小时内排出。通常情况下，排卵的快慢受犬年龄的影响，年轻的母犬比年老的母犬的排卵要略慢，卵子在输卵管内一般可以存活4~8天。在发情前期向发情期过渡时，浅层细胞增多，且逐渐的角质化。在接近排卵时看到的几乎都是角质化的表层细胞(80％-90％)，这些细胞单个的平铺于载玻片上。检验证明，大约75％的母犬在最大角质化程度后的第1-2天发生排卵。最大角质化程度持续1-6天，平均2.6天。

发情后期：是指发情期结束的后一个时期，以母犬不再吸引公犬和不再接受交配为标志，由于母犬血液中雌激素的含量逐渐下降，角化细胞被为角化的细胞和丰富的细胞碎屑代替，发情期后的大约10天，所以上皮细胞均是为角化细胞，嗜中性细胞数量的增加，直发情后期约第三天，然后大约10天下降至少量，一般情况下，发情后期都无红细胞，发情后期与休情期经常通过细胞学检查区分出来，不能根据细胞学检查将怀孕与发情后期或休情期区分。

 排卵检查：

   排卵检查目前常用的检查是阴道涂片与排卵仪检查。排卵仪是通过对犬阴道黏液的电阻率的变化测定其排卵时期；阴道涂片是根据细胞角化来鉴定犬的发情期，根据发情期来推断目前排卵期的。再就是常听到以唾液分析来确定排卵时间，经查阅大量国内外资料均没有对此方法的记载和报告，阴道涂片检查来推断排卵期的相对准确，但是单一的涂片检查有时候可以提供有用信息，但也可能是完全误导的，因此，强烈建议多次涂片，进行系统性评估。同样的是，排卵仪器也是必须做多次测试。单独使用排卵仪器检测2-4次是无效的。数值的高低对评估排卵期没有任何意义，排卵仪必须经过多次的测试，根据每次测试的结果，做统计表，一般回落的1-2天配种最佳（排卵仪器说明书中有阐述）。因此对于一个母犬排卵的生理特征的把握，必须经过多次多周期的重复测试，建立数据库。同时与体温、性情、外阴特征、体液分泌等关联体征的密切观察，才能更好更科学的把握。

阴道上皮细胞的分类

1、                     副基底细胞：间清期、发情早期、发情后期。

                      

   .副基底层细胞是阴道涂片中最小的上皮细胞，圆形或近圆形，具有较高的核质的比例，副基底层细胞大量出现于休情期间，少量见于发情前期和发情后期，发情期罕见，常伴有嗜中性粒细胞同时出现。

2、                    中间细胞：发情排卵前期

中间细胞形状和大小各不相同，但通常体积是副基底层细胞1-2倍。常被分为小中间细胞和大中间细胞，近圆形、椭圆形或多边形突出的大核，中间细胞大量出现在发情前期常伴有一定量的红细胞出现有时也可看到少量的副基底细胞和嗜中性粒细胞。

3、                     角化细胞：发情排卵期

          
角化上皮细胞是阴道细胞涂片中最大的细胞，分为完全角化细胞和不完全角化细胞。完全角化细胞的特点是细胞边缘不规则或卷曲，细胞核完全消失；不完全角化细胞与完全角化细胞的区别是是否存在细胞核，核质区域是否浓染变深。角化细胞是发情期的典型细胞，一般认为角化细胞的数量达到80%以上就证明已经进入发情期{但是在临床中我们对很多条不同年龄的犬（主要是德国牧羊犬）进行了从发情第九天开始不间断的阴道细胞学涂片检查，发现完全角化程度能达到85%以上的犬都小于3岁，而3岁以上的犬达到角化高峰期的时候完全角化细胞占得比例不是压倒性的往往伴随一定量的不完全角化细胞（核固缩的上皮细胞）}，此时可能伴有少量的中间细胞和红细胞，但副基底细胞和嗜中性粒细胞罕见。

                   关于公犬

   关于公犬的精子最长可在子宫内存活7天，前两天活力较高，某些犬有时候时间会较短，特别是经常配种的公犬精子活跃力普遍下降。

问题解答

1.为什么我家的母犬在医院检查排卵正常后没有正常受孕呢？

答：首先医院所谓的检查排卵，是通过阴道细胞学变化特征，卵泡生长增加了雌激素水平，进而导致阴道细胞粘膜角化，来确定犬的发情期，根据犬的发情期来推断排卵日期，需要犬主人的配合提前来院检测，必须多次阴道涂片，如果只涂片一次两次，当发现角化细胞，但是什么时间开始角化的这个是非常重要的，只有知道什么时间开始角化，才能准确推断出排卵日期，这种检验方法在70%-80%的母犬是有效的，需要说明的是通过发情期来推断母犬排卵时间，阴道涂片检查是检查不到排卵正常还是不正常的， 通过检查说排卵是否正常的观点是错误的。

不孕的原因很多，包括以下可能：

1、配种时间不佳：没有在排卵期进行交配。

2、病理性因素：细菌、寄生虫、病毒、支原体感染等。

3、生殖激素原因：假孕、卵巢囊肿等。

4、精液质量：包括精液的质量、精子的数量、精子的活力以及精子的运动方式等。

5、遗传因素：雌雄同体、阴道间隔。

6、年龄问题：2-6岁是犬生育力最好阶段。

7、行为异常：公犬或母犬不接受交配。

8、交配过程中的问题：交配环境噪声大、交配时间短，（公犬射精分三个阶段当公犬阴茎进入母犬阴道后2-3分钟就完成了第一阶段的射精过程，此阶段主要以大量的前列腺液（精液）为主含精子数量少，第二阶段精液中含精子量是最多的，所以一定要保证交配完全）。

2、配种前注射排卵针是否有用？

答：配种前注射排卵针是有效的，因为在医院检查后，医院一般是排除母犬患有排卵延迟、卵巢囊肿等生理病理病患。实际上卵泡囊肿的病患动物，注射也有一定作用的， 所谓的排卵针成分一般都是促黄体素释放激素A3，药理作用是能促使动物垂体前叶释放促黄体素（LH）和促卵泡素（FSH）促使卵巢的卵泡成熟而排卵，不但可使垂体已合成的激素立即释放，也能够刺激激素进一步合成。公犬使用可以促进精子生成。临床常用于1.提高产仔数。2.提高受胎率。3.治疗卵泡成熟度差、排卵迟缓、卵泡囊肿。4.加强超数排卵效果。5.加强黄体功能。特别是老年犬，一般排卵延迟，所以建议配种前注射排卵针，是有效的。

温馨提示：“排卵针”一定要大厂家质量好的！不能图便宜。

犬阴道涂片

一.所需材料：

1、             棉签（长度不得少于10厘米）

2、             载玻片

3、             显微镜

4、             染色液（最好使用上海双博排卵专用染色液）

二.采样过程及注意事项：

由犬主对犬进行保定，擦拭外阴（外阴有血迹或刚排完便的犬必须先擦拭干净），小犬用一根棉签，大犬可两根，用生理盐水湿润后使用。为何我们要使用10公分以上长度的棉签？因为我们的目标是获得从阴道上皮细胞样本，所以应避免阴道前庭采样，使用较长的棉签且质量必须好以防止棉签头部在采样时脱落。即使再小的狗也应该将棉签插入阴户几公分。

插入棉签后旋转棉签并反复几次轻微的抽动，以获得丰富的样本。

         我们医院所使用的棉签

三.涂片和染色：

 采样后迅速将棉签在已准备好的载玻片上顺时针或逆时针旋转，将棉签上的样本转移到载玻片上，不要来回反复涂片，以防细胞重叠。在自然温度下或借助于风筒将样品迅速干燥。

建议选用动物排卵专用染色剂？此染色剂的特点是染色时间短、样品着色确实、色彩艳丽清晰、无残渣及染液残留、保存时间长（我们使用的上海双博动物排卵染液就很好用）。

双博动物排卵专用染色剂分为A液与B液。标记好涂载玻片样品的一面，取A液1ml均匀滴于样品上，要将样品完全覆盖，30秒后取B液1ml均匀滴于样品上。轻轻上下晃动60秒（此时会看到载玻片上有沉淀物产生），用清水冲洗载玻片一端15秒左右（冲洗要轻，不要使样品脱落）然后用风筒将其吹干（应吹载玻片背面），最后用显微镜观察。

 
上图为我院使用排卵染色液染色的实际效果图

根据前面介绍的内容和细胞形态推断发情排卵时间，推断出发情排卵后，一般建议在次日上午（因为此时公犬的精子数量最丰富）安静舒适的环境下进行交配。

注：   必须在阴道上皮角化程度最高时，注射排卵针，不适当的注射排卵针可引起排卵前卵泡黄体化，妨碍正常受精卵的排出。